MiR-101通过调控ZEB1和ZEB2抑制浆液性卵巢癌EMT的研究

【摘要】卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤；大多数病人在确诊后5年内死亡。预后差主要是由于多数病人确诊时已是晚期,肿瘤大多已发生转移。上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymaltransition,EMT)是肿瘤转移过程中的重要组成部分。通过对卵巢癌的整合性分析,我们发现了调控EMT过程的主要的microRNA(miRNA)调控网络,其中包括miR-101。本研究中,我们讨论miR-101在EMT调控过程中的作用。通过荧光素酶报告基因分析,我们证明miR-101通过直接抑制ZEB1和ZEB2的3’非编码区(3’-untranslatedregion3’-UTR),从而上调E-cadherin的表达。过表达miR-101可显著抑制EMT过程及肿瘤细胞的迁移和侵袭。过表达ZEB1或ZEB2基因,miR-101不能增加E-cadherin的表达。上调卵巢癌细胞中miR-101的水平,miR-200家族无明显变化。我们的研究表明miR-101可通过调控E-cadherin的两个转录抑制因子,从而调控EMT过程,此过程不依赖于miR-200家族。本研究分为四个部分进行：1.对TCGA数据中459例浆液性卵巢癌的DNA拷贝数变化,启动子甲基化及miRNA表达数据进行整合分析,识别TCGA中间质表型基因表达谱。筛选7个浆液性卵巢癌细胞系,测定7个细胞系miR-101及E-cadherin的表达水平,检查二者是否存在正相关。2.将miR-101转染进卵巢癌细胞系,观察外源性miR-101对卵巢癌细胞EMT、迁移及侵袭的影响。3.构建pmirGLO-ZEB1,pmirGLO-ZEB2质粒和pmirGLO-ZEB13’-UTR-Ml,pmirGLO-ZEB13’-UTR-M2以及pmirGLO-ZEB23’-UTR-M突变质粒。检测miR-101是否直接靶向调控ZEB1和ZEB2。检测miR-101是否能够下调ZEB1和ZEB2的水平。4.分别使用2个针对不同作用位点的siRNA下调卵巢癌细胞中ZEB1或ZEB2蛋白的表达,观察是否同转染miR-101后的效果相似。构建ZEB1和ZEB2过表达质粒pcDNA3.1(+)-ZEBl和pcDNA3.1(+)-ZEB2,转染卵巢癌细胞,筛选稳定转染的细胞系。将miR-101转染稳定克隆细胞,观察ZEB1和ZEB2的表达是否下调,E-cadherin表达水平是否依然升高,以证实miR-101对EMT的抑制作用是由ZEB1和ZEB2介导的。通过本实验,可以得出以下几个结论：1.对TCGA数据中459例浆液性卵巢癌进行整合分析,将其分为上皮亚型(iE)和间质亚型(iM),后者与预后差相关。8个1niRNAs(miR-25,miR-506,miR-29c,miR-182,miR-128,miR-101,miR-141,andmiR-200a)可调控89%的miRNA相关基因,且在iM中的表达低于iE。miR-101在iM亚型中低表达和DNA拷贝数缺失有关。MiR-101在上皮性卵巢癌细胞系中的表达显著高于间质性细胞系。2.MiR-101可以显著增加上皮标志物E-cadherin的水平,下调间质标志物Fibronectin,N-cadherin及Vimentin,改变卵巢癌细胞形态,抑制卵巢癌细胞迁移及侵袭能力。3.MiR-101通过与ZEB1和ZEB2的3’UTR种子序列特异性结合,直接调控二者的表达,从而抑制卵巢癌EMT过程。4.MiR-101上调E-cadherin,抑制EMT过程,是通过与ZEB1或ZEB2的3’UTR上miR-101结合位点结合发挥的作用,该调控不依赖于miR-200家族成员。
【作者】郭飞；
【导师】薛凤霞；
【作者基本信息】天津医科大学，妇产科学，2014，博士
【关键词】卵巢癌；上皮-间质转化；miR-101；ZEB1；ZEB2；

【参考文献】
[1]黄臻洵.低介电常数聚酰亚胺/纯硅沸石杂化膜的制备[D].华南理工大学,2013.
[2]徐秋楠.新型功能纳米材料信号放大用于可抛式安培免疫传感器的研制[D].南京大学,2012.
[3]刘玉珍.基于甚低码率视频信号压缩编码技术研究[D].辽宁工程技术大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[4]王明月.同义成语差异研究[D].宁波大学,汉语言文字学,2013,硕士.
[5]曹利娜.螺旋受体分子的超分子自组装行为及其识别研究[D].吉林大学,分析化学,2013,硕士.
[6]孙明艳.激光液相烧蚀法制备SnS纳米材料及均匀分散Cd纳米晶[D].天津大学,2012.
[7]佟斯琴.大庆油田低渗透储层渗流规律及数值模拟技术研究[D].中国地质大学（北京）,2012.
[8]肖赵斌.QoS框架中队列调度功能的设计和实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[9]孙腾.基于XML的异构数据库集成的研究与应用[D].复旦大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[10]王芳妮.任务型教学在少儿英语教学中的应用研究[D].西北大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[11]王永鹏.论海上保险中的代位求偿权[D].对外经济贸易大学,法律,2004,硕士.
[12]侯文国,傅秀芬,谢翠萍.网格的数据挖掘[J].计算机应用研究,2004,10:241-243.
[13]张颖.听觉方位分辨训练增强成年大鼠初级听皮层神经元听空间方位选择性[D].华东师范大学,生理学,2013,硕士.
[14]李巍.补饲量对山场放养河北柴鸡的生产性能和蛋品质的影响[D].河北农业大学,动物营养与饲料科学,2004,硕士.
[15]薛鹏.高校图书馆信息生态系统评价研究[D].山东大学,图书馆学,2013,硕士.
[16]张雁慧.基于HSPs响应的氮胁迫下秀丽隐杆线虫的毒理效应[D].东北师范大学,环境科学,2012,硕士.
[17]黄丽萍.跨国公司研究与开发投资国际化及中国的对策[D].吉林大学,国际贸易学,2004,硕士.
[18]孙启泉.左乙拉西坦的质量研究[D].浙江工业大学,2008.
[19]张小川.基于融资租赁视角的中小企业融资问题研究[D].安徽大学,金融,2014,硕士.
[20]郝晓丽.氯腐蚀环境混凝土结构耐久性与寿命预测[D].西安建筑科技大学,结构工程,2004,硕士.
[21]周明霞.初创期高技术企业绩效评价方法研究[D].吉林大学,技术经济及管理,2004,硕士.
[22]许涛.创新网络特征对创新平衡模式影响机制的仿真[D].哈尔滨工业大学,国际贸易学,2013,硕士.
[23]陈秀丽.幼儿教师艺术领域课程实施的个案研究[D].湖南师范大学,学前教育学,2013,硕士.
[24]刘道静.巴测公司品牌策略研究[D].华东理工大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[25]谈恒贵,王文杰,李克双.频繁项集挖掘算法综述[J].计算机仿真,2005,11:1-4+18.
[26]林国新,田业,钱未未.数据仓库中异构数据的资源整合及挖掘[J].电力信息化,2004,09:46-49.
[27]葛建新,李海龙,董金祥,何志均.基于约束的装配体位置描述及求解[J].自动化学报,1996,01:41-48.
[28]余波.含稳态目标计算的预测控制方法研究[D].重庆大学,控制科学与工程,2014,硕士.
[29]王蕾.POSS改性红外高发射率金属氧化物膜材料的研究[D].哈尔滨工业大学,物理化学,2014,硕士.
[30]王静.北京市道路交通外部成本衡量研究[D].北京交通大学,2013.
[31]于春江.数字化技术对广告叙事的影响[D].东北师范大学,新闻学,2012,硕士.
[32]赵海第.高特质焦虑高中生的认知加工偏向研究[D].河北师范大学,心理健康教育,2013,硕士.
[33]任红轩,张玉,万菲.韩国第二期国家纳米技术路线图的启示[J].新材料产业,2015,03:37-39.
[34]琚成,贾芸芳.石墨烯在电子器件研究中的应用[J].太赫兹科学与电子信息学报,2014,03:325-329.
[35]王澍之.福柯《知识考古学》汉译本比较[D].北京外国语大学,法语翻译,2014,硕士.
[36]杨学斌,李玲,董玲玲.苯并噁嗪树脂的改性研究进展[J].塑料助剂,2014,02:17-20.
[37]王强.阳极氧化法制备自组装二氧化钛纳米管阵列研究[D].哈尔滨工业大学,材料物理与化学,2013,硕士.
[38]陈悦,李玲,何秋伶,陈进红,祝水金.镉胁迫对三个棉花品种(系)产量、纤维品质和生理特性的影响[J].棉花学报,2014,06:521-530.
[39]胡仰曾.一类非线性系统参数辨识的新方法及其在生化发酵过程建模中的应用[J].自动化学报,1990,06:522-528.
[40]沈朝霞.双动子永磁直线电机往复运动控制系统的研究[D].沈阳工业大学,电气工程,2003,硕士.
[41]李玉芳.基于成熟度视角的乡村旅游空间分异研究[D].浙江工商大学,旅游管理,2013,硕士.
[42]赵岩.城市“夹心层”群体住房保障问题研究[D].北京交通大学,2009.
[43]孔冬瑞.心翼果属、琼榄属（心翼果科）和粗丝木属（金檀木科）花发育及胚胎学研究[D].云南大学,植物学,2014,博士.
[44]张宇.基于一般二元关系的几种粗糙集模型[D].渤海大学,应用数学,2013,硕士.
[45]武小娟.不锈钢Ni-P化学镀层性能及动力学理论的研究[D].沈阳工业大学,材料加工工程,2013,博士.
[46]金磊.对安全减灾战略的五点建议[J].内部文稿.1999(06)
[47]赵晶.从肺脾论治肌萎缩侧索硬化患者的临床疗效观察[D].广州中医药大学,中医内科学（专业学位）,2013,硕士.
[48]马晖男.文本信息检索中修饰语作用的研究[D].大连理工大学,系统工程,2004,硕士.
[49]韩娜.基于多金属氧酸盐和多齿N/O配体的无机-有机杂化物的组装及性能研究[D].渤海大学,无机化学,2014,硕士.
[50]吴静静.无线Ad Hoc网络速率自适应技术研究[D].曲阜师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.